第五纵队（Fifth column），指在内部进行破坏，与敌方里应外合，不择手段意图颠覆、破坏国家团结的团体。现泛称隐藏在对方内部、尚未曝光的敌方间谍。

公元1936至1939年间，西班牙内战时期，弗朗西斯科·佛朗哥将军领导国民军与西班牙共和国军队发生冲突，佛朗哥手下一名将领埃米利奥·莫拉派遣四个纵队（columnas）进攻首都马德里，当记者问起他的作战策略，他说他拥有的四个纵队包围着西班牙首都马德里，另有一支纵队潜伏在马德里城里做内应的，实际上这只是为了敷衍记者的回答，然而共和政府认为关在监狱中的政治犯们就是莫拉口中的第五纵队，因而连夜将一千多名政治犯处决。另有詹姆斯·薛利丹（James Sheridan）所着的小说《潘朵拉处方》中揭露美国一群捍卫道德的医师为对抗只为图利的全国性药商的地下组织，其名亦为第五纵队。

A fifth column is any group of people who undermine a larger group—such as a nation or a besieged city—from within, usually in favor of an enemy group or nation. The activities of a fifth column can be overt or clandestine. Forces gathered in secret can mobilize openly to assist an external attack. This term is also extended to organized actions by military personnel. Clandestine fifth column activities can involve acts of sabotage, disinformation, or espionage executed within defense lines by secret sympathizers with an external force.